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小鼠心肌細胞的凍存方法和常見問題解決辦法介紹

更新時間:2021-09-27點擊次數:1908
  小鼠心肌細胞已廣泛用于成熟心肌細胞離子通道、蛋白免疫化學、心肌病及心肌梗塞等模型的實驗研究中,不僅在結構和功能上更接近在體細胞,并且成熟心肌細胞的體外培養模型可以排除成纖維細胞對實驗結果的干擾。
  心臟由心肌細胞和間質細胞組成,心肌細胞占心臟總體積的75%,但細胞數僅占心臟細胞總數的1/3,出生后心肌細胞喪失增值能力,是高度分化的終末細胞,主司收縮功能。間質細胞由成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經細胞及巨噬細胞等組成,成纖維細胞占間質細胞90%以上,成纖維細胞具有分泌功能,合成和分泌生物活性物質,調節自身膠原的產生及周圍心肌細胞的形態結構和生理功能。
  心肌細胞按生理功能分為兩類:一類為工作細胞,包括心房肌及心室肌,胞漿內含有大量肌原纖維,因而具有收縮功能,主要起機械收縮作用。除此以外,還具有興奮性、傳導性而無自律性。另一類為特殊分化的心肌細胞,包括分布在竇房結、房間束與結間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細胞,胞漿中沒有或很少有肌原纖維,因而無收縮功能,主要具有自律性,有自動產生節律的能力,同時具有興奮性、傳導性。
  一、小鼠心肌細胞凍存方法
  1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
  2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管;
  3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜;
  二、常見問題及解決方案
  1、培養瓶有破裂,培養液有漏液:可能會污染,所以我們會及時解決。
  2、細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養。
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