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小鼠心肌細(xì)胞的凍存方法和常見問題解決辦法介紹

更新時間:2021-09-27點擊次數(shù):2210
  小鼠心肌細(xì)胞已廣泛用于成熟心肌細(xì)胞離子通道、蛋白免疫化學(xué)、心肌病及心肌梗塞等模型的實驗研究中,不僅在結(jié)構(gòu)和功能上更接近在體細(xì)胞,并且成熟心肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型可以排除成纖維細(xì)胞對實驗結(jié)果的干擾。
  心臟由心肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞組成,心肌細(xì)胞占心臟總體積的75%,但細(xì)胞數(shù)僅占心臟細(xì)胞總數(shù)的1/3,出生后心肌細(xì)胞喪失增值能力,是高度分化的終末細(xì)胞,主司收縮功能。間質(zhì)細(xì)胞由成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等組成,成纖維細(xì)胞占間質(zhì)細(xì)胞90%以上,成纖維細(xì)胞具有分泌功能,合成和分泌生物活性物質(zhì),調(diào)節(jié)自身膠原的產(chǎn)生及周圍心肌細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能。
  心肌細(xì)胞按生理功能分為兩類:一類為工作細(xì)胞,包括心房肌及心室肌,胞漿內(nèi)含有大量肌原纖維,因而具有收縮功能,主要起機械收縮作用。除此以外,還具有興奮性、傳導(dǎo)性而無自律性。另一類為特殊分化的心肌細(xì)胞,包括分布在竇房結(jié)、房間束與結(jié)間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細(xì)胞,胞漿中沒有或很少有肌原纖維,因而無收縮功能,主要具有自律性,有自動產(chǎn)生節(jié)律的能力,同時具有興奮性、傳導(dǎo)性。
  一、小鼠心肌細(xì)胞凍存方法
  1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞;
  2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
  3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜;
  二、常見問題及解決方案
  1、培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:可能會污染,所以我們會及時解決。
  2、細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
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